一、菌种保存的基本原则

1.保持菌种纯净：严防杂菌污染，确保菌种的纯度和特性。

2.适时移植继代：避免菌种因长时间未培养而死亡或失去活性。

3.保持原有特性：通过适宜的实验条件，尽量减少菌种的变异。

4.安全保管：提高警惕，防止菌种外散，造成疾病传播或环境污染。

二、菌种保存的具体方法

1.斜面低温保藏法

o 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏。

o 每隔一定时间（如几个月）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏。

o 此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏。

2.石蜡油封藏法

o 在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，使培养物与空气隔绝。

o 加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。

o 此法适于保藏霉菌、酵母菌、放线菌、好氧性细菌等，保藏期可达1～2年或更长。

3.砂土管保藏法

o 将砂与土分别洗净、烘干、过筛后混匀，分装于小试管中，进行灭菌处理。

o 需要保藏的菌株先用斜面培养基充分培养，再以无菌水制成菌悬液滴入砂土管中。

o 置于干燥器中抽真空后用火焰熔封管口（或用石蜡封口），置于干燥器中或4℃冰箱内保藏。

o 此法适用于产孢子的放线菌、霉菌及形成芽孢的细菌，保藏期较长。

4.甘油悬液保藏法

o 将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保藏。

o 甘油的终浓度一般在10%～15%，保藏温度可采用-20℃或-70℃。

o 此法较简便，但需置备低温冰箱，保藏期根据温度不同而有所差异。

5.冷冻真空干燥保藏法

o 用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中。

o 在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥。

o 在真空条件下立即融封安瓿管口，造成无氧真空环境，置于低温下保藏。

o 此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，存活率高，变异率低。

6.液氮超低温保藏法

o 以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在液氮超低温（-196℃）下保藏菌种。

o 此法操作简便、高效，保藏期一般可达到15年以上，适用于各种微生物菌种的保藏。

7.宿主保藏法

o 适用于专性活细胞寄生微生物（如病毒、立克次氏体等）。

o 针对宿主细胞的特性进行保存，如寄生在活的动植物或其他微生物体内。

三、菌种保存的注意事项

1.建立档案：入库菌种应建立档案，详细记录菌种名称、编号、来源、保存日期等信息。

2.双人双管：菌种实行双人双管保存，确保菌种的安全性和可追溯性。

3.定期转种与鉴定：按规定时间转种，并定期对菌种进行鉴定，检查其是否发生变异