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保存菌种的常用方法

行业新闻 2025-03-12

1.斜面低温保藏法 

将菌种接种到适合的固体斜面培养基上,待菌种充分生长后,使用油纸将棉塞部分包扎好,然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存。

适用于霉菌、放线菌及有芽孢的细菌,一般可保存2-4个月,需要移种一次。

酵母菌一般可保存2个月,需要每个月移种一次

2.液体石蜡覆盖保藏法 4

将液体石蜡装在三角烧瓶中,使用棉塞塞好,用牛皮纸包扎,然后在0.1MPa121.3℃的环境下灭菌30分钟,接着放置在40℃的温箱中蒸发水汽。

将需要保藏的菌种接种到适合的斜面培养基上,得到健壮的孢子或菌体,使用灭菌过的吸管将液体石蜡吸出,注入斜面上,直立放置在低温或室温下保存。

霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上,酵母菌可保藏1-2年,无芽孢细菌可保藏1年,脑膜炎球菌可保藏3个月(37℃环境下)。

3.滤纸保藏法 

准备好滤纸条(0.5×1.2cm),安瓿管(0.6×8cm),每个安瓿管放置1-2张滤纸条,塞上棉塞,在0.1MPa、121℃的环境下灭菌30分钟。

该方法适用于需要长期保存的菌种,但具体保存时间未详细说明5。

4.培养基保存法 

将菌种接种到适合的固体或半固体培养基上,根据需要定期转种和检查菌株特性。

适用于营养要求不高的细菌,一般2-3月转种一次,并检查菌株特性,如特性已改变,则需丢弃。

5.快速冷冻法 :

将纯培养细菌在液体培养基上增菌后,取数个新鲜菌落加入含小牛血清或脱纤维绵羊血的培养基内制成浓菌悬液,再放入无菌玻璃珠,将此瓶放入-30℃以下低温冰箱保存

6.冷冻真空干燥法 

将加入一定保护剂(如无菌脱脂牛奶)的菌种悬液冷冻,然后在冻结状态下经过真空干燥,使菌种处于半长期性的休眠状态,从而达到长久保藏的目的。

一般可保藏数年甚至数十年之久,但需要特殊的低温干燥设备

7.液氮超低温保藏法 

将保藏的菌种分散在保护剂中(如甘油、二甲亚枫、蔗糖和吐温80等),或将平板上生长良好的培养物打块,原封不动地置于保护剂中,预冻后保藏在液氮超低温(-196℃)中。

该法是目前较理想的菌种保藏方法,可较长期保藏菌种

8.甘油管藏法 :

将菌液与40%甘油等体积混合,分装至冻存管,-80℃保存。

保存时间可达1-2年(细菌)和5年以上(部分真菌),复活率高(>90%),操作标准化,适合高通量保存

9.干燥保藏法 :

将微生物赖以生存的水分蒸发掉,使细胞处于休眠和代谢停滞状态,从而达到较长期保藏菌种的目的,低温条件下保存期可达数年至十几年之久

10.沙土保藏法 :

将菌种与沙土混合后保存在干燥、避光、低温的环境中,适用于某些特定菌种的长期保存。

瓷珠保藏法 :

微基生物在上述几种菌种保藏方法的基础上,开发出了保菌效果更好的瓷珠保藏法