凯氏定氮法（Kjeldahl Method）是一种经典的测定有机物中氮含量的方法，尤其广泛用于食品、饲料、土壤等样品中蛋白质含量的测定。其基本原理是通过将样品中的有机氮转化为无机氮（铵盐），再通过滴定法测定氮含量，最后换算为蛋白质含量。

一、凯氏定氮法的步骤

（1）消化（Digestion）

样品与浓硫酸（H₂SO₄）和催化剂（如硫酸铜CuSO₄、硫酸钾K₂SO₄）一起加热，使有机物分解。

有机氮在强酸和高温下转化为无机铵盐（(NH₄)₂SO₄）。

消化反应需持续至溶液澄清（通常1-2小时）。

反应式：

有机氮+H₂SO₄→              (NH₄)₂SO₄+CO₂+H₂O+其他产物

催化剂, 加热

（2）蒸馏（Distillation）

消化液冷却后，加入过量氢氧化钠（NaOH）使溶液碱化，释放氨气（NH₃）。

通过蒸馏将氨气导入吸收液（通常为硼酸溶液，H₃BO₃）。

反应式：

(NH₄)₂SO₄+2NaOH→2NH₃+Na₂SO₄+2H₂O

（3）滴定（Titration）

用标准酸溶液（如盐酸HCl或硫酸）滴定吸收液中的硼酸铵。

通过指示剂（如甲基红-溴甲酚绿混合指示剂）确定终点，计算氮含量。

反应式：

H₂BO₃⁻+H⁺→H₃BO₃

（4）蛋白质含量计算

氮含量计算：

氮含量（%）=(V样品−V空白)×C×14.01/m样品×100

V：滴定体积（mL），

C：盐酸/硫酸的浓度（mol/L），

m样品：样品质量（g），14.01为氮的摩尔质量（g/mol）。

蛋白质换算：

蛋白质含量 = 氮含量×蛋白质换算系数

不同样品的换算系数不同（如乳制品为6.38，小麦为5.70，一般食品为6.25）。

二、注意事项

（1）准确性：

凯氏定氮法无法区分蛋白氮和非蛋白氮（如尿素、核酸等），可能高估蛋白质含量。

需通过空白试验消除试剂干扰。

（2）改进方法：

杜马斯燃烧法：现代替代方法，通过高温燃烧直接测定总氮，更快速且无需化学试剂。

（3）应用限制：

不适用于含硝基（-NO₂）、亚硝基（-NO）或偶氮（-N=N-）等非蛋白氮的样品。

（4）优缺点

优点：操作简单、成本低、适用范围广。

缺点：耗时、使用强酸强碱、无法区分氮来源（如三聚氰胺掺假事件中的漏洞）。

如需更精确的蛋白质分析，可结合其他方法（如高效液相色谱HPLC或光谱法）。