平板涂布法的核心操作过程分为样品稀释和涂布培养两步，最终目标是通过梯度稀释和均匀涂布实现菌落分离或定量计数。‌

操作步骤详解

‌样品稀释液制备‌

准备无菌试管：通常使用6-9支装有9ml无菌水的试管，按10⁻¹至10⁻⁶（或更高）梯度编号。

梯度稀释操作：

用灭菌移液管吸取1ml原始菌液，加入10⁻¹试管中，吹吸3次混匀；

从10⁻¹试管中取1ml转移至10⁻²试管，重复混匀，依此类推直至最高稀释度。

‌稀释度选择原则‌：根据不同微生物调整，如细菌常用10⁻⁷~10⁻⁹，放线菌用10⁻³~10⁻⁵，真菌用10⁻²~10⁻⁴。

‌涂布操作‌

预处理：将固体培养基平板在超净台中预干燥20分钟，避免涂布时菌液被稀释。

涂布器灭菌：

涂布器浸入酒精后灼烧，冷却8-10秒（避免高温杀死菌种）；

菌液涂布：

取0.1ml稀释菌液滴至培养基表面；

以30°角用涂布器均匀涂开，同时转动培养皿确保覆盖整个表面；

静置吸收：涂布后静置5分钟，待菌液渗入培养基。

‌培养与观察‌

倒置平板于恒温箱中培养（倒置防止冷凝水滴落干扰菌落）；

选择菌落数在30-300之间的平板进行计数