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食品中金黄色葡萄球菌的检测

行业新闻 2025-06-13

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是常见的食源性致病菌,其产生的肠毒素可导致食物中毒。

一、检测标准依据

国际标准:ISO 6888-1:2021(平板计数法)、FDA BAM(《细菌学分析手册》)第12

中国国家标准:GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》

二、检测流程(以GB 4789.10-2016为例)

1. 样品处理

无菌取样:25g/mL样品 + 225mL无菌生理盐水或缓冲蛋白胨水(BPW),均质后制成1:10稀释液。

2. 增菌培养(选择性富集)

7.5%氯化钠肉汤:36℃±1℃培养18-24小时,促进金黄色葡萄球菌生长(抑制部分杂菌)。

3. 分离培养

接种至选择性培养基:Baird-Parker琼脂平板(含亚碲酸钾和卵黄)在36℃±1℃条件下培养24-48小时。

典型菌落:黑色凸起、边缘光滑,周围有透明圈(卵磷脂酶活性)和浑浊环(脂肪酶活性)。

血琼脂平板(辅助鉴定):观察溶血环(β-溶血)。

4. 确证试验

革兰染色镜检:阳性球菌,呈葡萄串状排列。

生化鉴定:

凝固酶试验(试管法/玻片法):阳性(血浆凝固)。

过氧化氢酶试验:阳性。

其他:甘露醇发酵、耐热核酸酶试验等。

分子生物学方法:PCR检测nuc基因(编码耐热核酸酶)或coa基因(凝固酶)。

5. 肠毒素检测(如需要)

采用ELISA、免疫层析法或质谱法检测肠毒素(SEA-SEE等)。

三、快速检测方法

显色培养基(如CHROMagar™):菌落呈特定颜色(如粉红色)。

免疫学方法:乳胶凝集试剂盒检测凝固酶或肠毒素。

实时荧光PCR:直接检测样品中的金黄色葡萄球菌特异性基因。

自动化仪器:如VITEK®MALDI-TOF MS(质谱快速鉴定)。

四、结果报告

定量报告(平板计数法):CFU/gmL)。

定性报告:检出/未检出。

五、注意事项

避免假阳性:凝固酶试验需结合其他生化结果(如某些凝固酶阴性葡萄球菌可能干扰)。

样品代表性:高风险食品(如乳制品、熟肉、糕点)需重点监控。

生物安全:实验操作应在生物安全二级(BSL-2)实验室进行。

六、常见适用食品

乳及乳制品、肉制品、即食食品、调味品、冷冻饮品等。