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食品中金黄色葡萄球菌的检测
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是常见的食源性致病菌,其产生的肠毒素可导致食物中毒。
一、检测标准依据
国际标准:ISO 6888-1:2021(平板计数法)、FDA BAM(《细菌学分析手册》)第12章
中国国家标准:GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》
二、检测流程(以GB 4789.10-2016为例)
1. 样品处理
无菌取样:25g/mL样品 + 225mL无菌生理盐水或缓冲蛋白胨水(BPW),均质后制成1:10稀释液。
2. 增菌培养(选择性富集)
7.5%氯化钠肉汤:36℃±1℃培养18-24小时,促进金黄色葡萄球菌生长(抑制部分杂菌)。
3. 分离培养
接种至选择性培养基:Baird-Parker琼脂平板(含亚碲酸钾和卵黄)在36℃±1℃条件下培养24-48小时。
典型菌落:黑色凸起、边缘光滑,周围有透明圈(卵磷脂酶活性)和浑浊环(脂肪酶活性)。
血琼脂平板(辅助鉴定):观察溶血环(β-溶血)。
4. 确证试验
革兰染色镜检:阳性球菌,呈葡萄串状排列。
生化鉴定:
凝固酶试验(试管法/玻片法):阳性(血浆凝固)。
过氧化氢酶试验:阳性。
其他:甘露醇发酵、耐热核酸酶试验等。
分子生物学方法:PCR检测nuc基因(编码耐热核酸酶)或coa基因(凝固酶)。
5. 肠毒素检测(如需要)
采用ELISA、免疫层析法或质谱法检测肠毒素(SEA-SEE等)。
三、快速检测方法
显色培养基(如CHROMagar™):菌落呈特定颜色(如粉红色)。
免疫学方法:乳胶凝集试剂盒检测凝固酶或肠毒素。
实时荧光PCR:直接检测样品中的金黄色葡萄球菌特异性基因。
自动化仪器:如VITEK®、MALDI-TOF MS(质谱快速鉴定)。
四、结果报告
定量报告(平板计数法):CFU/g(mL)。
定性报告:检出/未检出。
五、注意事项
避免假阳性:凝固酶试验需结合其他生化结果(如某些凝固酶阴性葡萄球菌可能干扰)。
样品代表性:高风险食品(如乳制品、熟肉、糕点)需重点监控。
生物安全:实验操作应在生物安全二级(BSL-2)实验室进行。
六、常见适用食品
乳及乳制品、肉制品、即食食品、调味品、冷冻饮品等。