一、原理
 
微生物在甘油溶液中可以降低细胞内水分的活性，减少冰晶的形成，从而避免细胞在冷冻过程中受到损伤，同时甘油可以在细胞表面形成一层保护膜，保护细胞的完整性和活性。

二、操作步骤

1、准备甘油溶液：一般使用浓度为15% - 50%（体积分数）的甘油溶液，通常采用30%的甘油溶液较为常见。将适量的甘油用去离子水稀释，然后高压蒸汽灭菌备用。
2、收集菌体：将培养至对数生长期的微生物细胞收集起来，可以通过离心等方法使细胞沉淀。
3、重悬菌体：用适量的灭菌甘油溶液将收集到的菌体重悬，使细胞均匀分布在甘油溶液中。
4、分装保存：将重悬后的菌液分装到无菌的冻存管中，每管装量不宜过多，一般为1 - 2毫升。然后将冻存管放入-20℃或-80℃的低温冰箱中保存。

三、注意事项

1、甘油浓度：甘油浓度过高或过低都可能影响保菌效果，需根据不同的微生物种类进行优化。
2、细胞状态：用于保藏的微生物应处于良好的生长状态，一般选择对数生长期的细胞，这样的细胞具有较强的活力和耐受性。
3、冻存与复苏速度：冻存时应尽量快速降温，可采用液氮速冻等方式，复苏时则应快速升温，如在37℃水浴中迅速解冻，以减少对细胞的损伤。